El complejo Pseudallescheria/Scedosporium y taxas afines en la rutina del laboratorio micológico clínico

Abstract

El complejo Pseudallescheria/Scedosporium y taxas relacionados, pertenecientes a un grupo de microhongos con conidios viscosos e integrantes del orden Microascales, se presentan en diversos ambientes comunes asociados a las actividades humanas, ya sea en el suelo como en aguas contaminadas. Actualmente se consideran entre los mayores grupos de hongos filamentosos oportunistas causante de infecciones cutáneas y profundas en el hombre y otros mamíferos. El objetivo principal de este trabajo, consiste en reunir los datos primarios morfofisiológicos más relevantes, útiles para el micólogo médico en el laboratorio, con el aporte adicional de algunos aspectos, biológicos, ecológicos, taxonómicos y moleculares complementarios descritos en la literatura moderna.

Full text

RESUMEN
El complejo Pseudallescheria/Scedosporium y taxas
relacionados, pertenecientes a un grupo de microhongos con
conidios viscosos e integrantes del orden Microascales, se
presentan en diversos ambientes comunes asociados a las
actividades humanas, ya sea en el suelo como en aguas
contaminadas. Actualmente se consideran entre los mayores
grupos de hongos filamentosos oportunistas causante de
infecciones cutáneas y profundas en el hombre y otros
mamíferos. El objetivo principal de este trabajo, consiste en
reunir los datos primarios morfofisiológicos más relevantes,
útiles para el micólogo médico en el laboratorio, con el aporte
adicional de algunos aspectos, biológicos, ecológicos,
taxonómicos y moleculares complementarios descritos en la
literatura moderna.
taxas (generalmente 4 o 5) se presentan comúnmente
en los diferentes cuadros clínicos de la literatura
internacional, lo que permite en cier ta medida,
diferenciarlos morfológicamente con la ayuda de
algunos datos fisiológicos, una situación de gran
ayuda en los hospitales que no poseen en su rutina
las técnicas moleculares (Gilgado et al., 2008;
Perdomo, 2011). En la actualidad, Pseudallescheria
boydii se ha subdividido en numerosas especies,
varias de las cuales son prácticamente indistinguibles
por ca racteres f enotípicos en uso. Un fact or
complicado consiste en los diferentes grados de
entrecruzamiento y clonalidad entre las especies, lo
que complica que estas entidades genealógicas
pueden referirse como a especies en el sentido
clásico. Sin embargo, aceptamos en un amplio
consenso que Pseudallescheria es un complejo de
especies y no una única especie (Perdomo, 2011;
de Hoog et al., 2011).
Debido a lo disperso de la información científica
relacionada con este complejo, el objetivo principal
de esta presentación, es reunir los datos fenéticos
más relevantes útiles para el micólogo en el laboratorio,
con el aporte adicional de algunos aspectos,biológicos,
REVISIÓN 65
El complejo Pseudallescheria/Scedosporium y taxas afines en la rutina del
laboratorio micológico clínico
(The Pseudallescheria/Scedoporium complex and related taxa in the routine of clinic mycological
laboratory)
Eduardo Piontelli L *.
Universidad de Valparaíso, Escuela de Medicina, Cátedra de Micología.
Casilla 92 V, Valparaíso Chile.
*Autor para correspondencia: eduardopiontelli@hotmail.com
Recibido:26-12-12
Aprobado:02-01-13
Palabras Clave: Pseudallescheria/Scedosporium complex, taxa relacionados.
Key words: Pseudallescheria/Scedosporium complex, related taxa.
ABSTRACT
The Pseudallescheria/Scedosporium complex and
their related taxa are a group of fungus that conidia are presents
in viscous mass and belong to the order Microascales. They
are in several common enviroment related to human activities
either in soil as in contaminated water. Nowadays they are
considerated one of the most oppor tunistic group of
filamentous fungus that may cause superficial and deep skin
mycoses infections in man and other mammalian. The aim
of thi s wo rk is to ga ther the p rimar y re levant
morphophysiological asp ects, usefull to the medical
mycologist in the laboratory, plus the contribution of some of
bi olo gical, ec ological, taxon omical an d mole culars
complementary aspects that are describe in modern literature.
INTRODUCCIÓN
El complejo Pseudallescheria/Scedosporium
ap iosp ermum, integra a un grupo de hongos
opor tunistas ambientales emergentes y relevantes,
causantes de un amplio rango de micosis clínicas
superficiales y diseminadas ya sea en pacientes con
compromiso inmune y ocasionalmente en inmuno-
competentes. Estas infecciones comunes en todo el
mundo, tienen un relativo alto grado de virulencia que
puede deducirse por su infrecuente ocurrencia de sus
especies en el aire, pero su alta prevalencia en los
pulmones de pacientes suceptibles, en especial en
pacientes con fibrosis quística, así como por
presentar un alto nivel de resistencia a los antifúngicos
(Guarro et al., 2006; Cortez et al., 2008; Lackner et
al., 2011a-b). En este último decenio, los integrantes
de este complejo y géneros afines se han diversificado
como entidades taxonómicas, difiriendo en su
ecología y en la habilidad de causar infecciones en
hu manos y animales, s ituació n que debe ser
reconocida y diagnosticada por el micólogo médico
(Gilgado et al.,2005-2008-2010; Kaltseis et al., 2009;
Eggertsberger et al., 2010). Un limitado número de
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ecológicos, taxonómicos y moleculares complemen-
tarios descritos en la literatura moderna.
Aspectos bioecológicos.
Elcomplejo Pseudallescheria/Scedosporium
(Pezizomycotina, Microascales, Microascaceae), es
conocido desde el siglo 19 por sus infecciones poco
comunes en humanos, sin embargo, en nuestros días
se le considera entre los grupos de oportunistas
frecuentes en climas temperados y más esporádicos
en los trópicos (Cor téz et al., 2008). No se conoce
claramente su nicho natural, sin embargo, los
ambientes donde se ha aislado, presentan una fuerte
influencia asociada a la actividad humana (Guarro et
al., 2006; Kaltseis et al.,2009a). Se encuentra
comunmente en el suelo (Ajello ,1952; Cortez et al,
2008; Harun et al.,2009a), en especial en suelos
enriquecidos o contaminados, tales como suelos
agricolas o de jardines (Bakerspigel & Schaus, 1984),
alcantarillas (Cooke & Kahler,1955), cunetas con barro,
ambientes osmóticos, como aguas marinas de
estuarios, suelos marinos y madera sumergida en
estuarios. así como en diferentes tipos de guano
(Kirk,1967; Dabrova et al.,1964), como también en
suelos con hidrocarburos donde pueden asimilar gas
naturas y compuestos aromáticos, pudiendo usarse
como agentes de bioremediación (Clauben & Schmidt,
1999).Todos estos ambientes pobremente aireados,
permiten que el hongo pueda crecer a baja tensión de
oxígeno o en condiciones anaeróbicas y tolerar in vitro
5% de cloruro de sodio (De Hoog et al.,(1994).
El traslado de los integrantes de este complejo
desde un hábitat par ticular determinado (rurales u
otros) a otros diferentes nichos ecológicos naturales
poco conocidos, incluyendo los nuevos ambientes
dominados por el hombre, puede permitir una selección
de genotipos vir ulent os (cepas clínicas versus
ambientales). Esto ofrece una amplia oportunidad para
las especies, aumentand o muchas de ellas su
virulencia sin poner en riesgo su propia existencia.
Mientras más rápido crecen los genotipos resistentes,
muchas cepas tienen más capacidad de transmisión
y selección, quizás en un cor to camino evolutivo
(De Hoog, 2012).
A pesar de su ocurrencia en los suelos y aguas
en climas temperados, el compejo Pseudallescheria/
Scedosporium es consistentemente termotolerante
(37-42°C) con la habilidad de sobrevivencia a muy
bajas presiones de oxígeno.(Dabrowa et al., 964;
Kaltseis et al., 2009; Eggertsberger, et al., 2010).
Esto podría indicar un nicho ecológico asociado a los
animales de sangre caliente como vectores de
diseminación (http://www.scedosporium-ecmm.com/
DefaultInfo.aspx?Page=Home.....2010).
Importancia clínica.
Los cuadros clínicos más diversos encontrados
en la literatura son comunes en todo el orbe, ya sea
en pacientes con compromiso inmmune como en
inmunocompetentes: micetoma, ar tritis, osteomielitis,
endof talmitis u otras infecciones ocu lares,
onicomic osis, sinusitis , otit is, bola s fúng icas
pulmonares, broncopatías alérgicas, cuadros graves
con infecciones pulmonares invasivas, endocarditis,
infecciones del sistema nervioso central, entre otras
( D e H o o g et al., 2000; Dalton et al., 2006; Guarro et
al., 2006; Cortez et al., 2008; Rodriguez-Tudela, et al.
(2009). Cortez et al., 2008; Harun et al., 2009b;
Gelaber t-González et al., 2010). Muchos de estos
cuadros clínicos derivan en micosis sistémicas, con
altas tasas de mor talidad debido a la elevada
virulencia y a la resistencia a los tratamientos
antifúngicos convencionales que presenta este grupo
de hongos, en especial S.prolificans (Alastruey-
Izquierdo, et al., 2007; Cortez et al., 2008, Rodriguez-
Trudela et al., 2009; Lackner et al., 2011). En Chile,
se han descrito diversos casos de scedosporiosis,
principalmente del complejo Pseudalle scheria/
Scedosporium yS. prolificans (Oddo, et al., 1985;
Díaz et al., 2004; Briones et al., 2006; Chanqueo et
al., 2009, entre otros). Debe destacarse el reciente
aislamiento de Psudallescheria boydii sensu stricto,
en un paciente con cuadro sinusal (Nota del autor).
Las especies clínicamente más relevantes son:
Ps eudalles cheria boydii con su anamor fo
Scedosporium boydii, Scedosporium apiospermum,
an amor f o de Ps e udallesc heria ap iosperma,
Sce d ospori um aura ntiacum, S cedospo rium
prolificans y Scedosporium de hoogii, mientras
Ps eudalles cheria min utispora ,Petriellopsis
desertorum y algunos integrantes del género Petriella
son agentes excepcionales en micosis humanas o
animales (Issakainen et al. 1997, 1999, de Hoog et
al. 2000,Okada et al. 2000; Gilgado et al., 2005- 2008-
2010; Cor tez et al., 2008).
Aspectos Taxonómicos.
El género ha experimentado diversos cambios
en su nomenclatura en el tiempo. Saccardo, en 1911,
aisló de un paciente con micetoma un hongo al cual
denominó Monosporium apiospermum, posterior-
mente el mismo autor lo denominó Scedosporium,
sin proponer formalmente el género. En 1919,
Ca stellani y Chalmers validan el nombr e
Sce d ospori um con la nueva combinación , S.
apiospermum. En 1922, Shear describe un nuevo
ascomycete, Allescheria boydii , aislado de un
micetoma y Emmons (1944), sugirió que S.
apiospermum era el anamorfo de A. boydii. En 1970,
Malloch reclasificó el teleomorfo como Petriellidium
boydii, y más tarde esté genero fue considerado si-
nónimo de Pseudallescheria. Hughes (1958), acepta
S.apiospermum como nombre correcto para el
anamorfo de P. boydii.
Malloch y Salkin(1984), describieron la nueva
especie Scedosporium inflatum, aislada de médula
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ósea en un niño inmunocompetente y Gueho y De
Hoog (1991), mediante reasociación ADN/ADN,
demostraron que Lomentospora prolificans tenía
100% de identidad con S. inflatum y propusieron la
nueva combinación S. prolificans. Más recien-
temente, a partir de datos genéticos y morfológicos,
Gilgado et al. (2005, 2008, 2010) propusieron nuevas
especies (S. aurantiacum, S. boydii yS.dehoogii,
esta última incluye la nueva especie S. deficiens
(R ainer & Ka ltseis 2010), lo que ind ica la
heterogeneidad de sus integrantes.
Aspectos fenéticos y filogenéticos útiles en el
diagnóstico
Los integrantes del género polimórfico Scedos-
porium y sus relativos, incluyen anamor fos con
conidios húmedos. Graphium y Parascedosporium
también per tenecen a este complejo, mientras los
teleomorfos se encuentran en Pseudallescheria,
Petriella, Petriellopsis y Lophotricus (von Arx y col.,
1988; de Hoog y col., 2000; Gilgado et al.,2005, 2007,
2009; Lackner & de Hoog, 2011).
La biología molecular subdivide en varios clados
fisiológicos, genéticos y ecológicos a este grupo de
hongos (Lakner et al., 2010; Lackner & de Hoog,
2011). El clado opor tunista Pseudallescheria, se ca-
racteriza por la producción de cuerpos fructíferos ce-
rrados (cleistotecios), esféricos (Fig. 1), con paredes
finas, membranáceas y de textura “epidermoidea”
(Shear, 1922). Los ascos suelen ser esféricos, de
paredes delgadas, evanescentes y contienen gene-
ralmente ocho ascosporas usualmente simétricas,
elipsoidales o fusiformes. Incluye las sigueintes es-
pecies: Scedosporium aurantiacum, Scedosporium
deh o ogii, Ps eudalles c h e ria minutispora ,
Pseud allesche-ria angusta, Pseudallesche ria
api osperma , Pse u dal-lesch e ria deserto rum
(=Petrellidium desertorum); esta última es otra es-
pecies estrechamente relacionada (Lu et al., 2011).
Scedosporium (fFg. 2A-B) se caracteriza por pre-
sentar conidioforos usualmente no ramificados, con cé-
lulas conidiógenas anelídicas. Las células conidiógenas
o anélides pueden presentarse también en forma sé-
sil sobre hifas indiferenciadas, con conidios de for-
ma obovoidal y de color marrón. (Dykstra et al.,1989).
Scedosporium prolificans, integra un clado
separado, sin teleomorfo conocido, sin embargo,
es también oportunista en el hombre y representa
el más cercano relativo a Parascedosporium putredinis
como clado hermano. En contraste con S. prolificans,
P. putredinis fue reportado solo 1 vez en una infección
humana por Vuillemin en 1910, como Rhinocladium
lesnei.Sin embargo, se ha dudado de la credibilidad
de este caso y no se ha encontrado nuevamente en
infecciones humanas (Lackner & de Hoog, 2011).
Petriella sordida, Petriella guttulata , Petriella
setifera y Petrellopsis africana, forman un clado se-
parado asociado al suelo y los excrementos y apa-
rentemente no se han detectado en infecciones hu-
manas.
Gilgado et al. (2007) introducen el género poli-
mórfico Parascedosporium en su revisión de Scedos-
porium; su descripción fué basada en una cepa au-
téntica de Graphium tectonae (Booth 1964), CBS
127.84, que renombraron Parascedosporium tectonae,
aislado de semillas de Tectonia grandis en Jamaica.
Figura 2. A. Célula conidiògena joven deScedosporium
apiospermum, B. Detalle de anélide en célula conidió-
gena madura (flecha)
AB
Figura 1- Cleistotecio de Pseudallescheria boydii
con sus paredes de textura epidermoidea
Figura 3. A. Parascedosporium putredinis. Conidios
semejantes a scedosporium que nacen lateralmente
sobre dentículos. B. Estado de Graphium
5 µm
10 µm 10 µm
50 µm
A
B
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Scedosporium,consistentemente presenta una
conidiogénesis percurrente, mientras Parascedos-
porium presenta una conidiogénesis simpodial con
conidios semejantes a scedosporium. Lackner & de
Ho og (2011 ), investigaron las características
morfológicas de varias cepas de G. putredinis y una
cepa de Parascedosporium tectonae, obsevando que
todos los aislados presentan las caracteríasticas de
conidióforos solitarios semejantes a scedosporium,
que originan células conidiógenas laterales cilíndri-
cas con 2-5 dentículos cilíndricos, incluso algunas
cepas farman sinnemata adicional con conidiogénesis
anelídica. Debido a esto concluyen que la nomencla-
tura de este grupo de especies debe modificarse en
una nueva combinación como Parascedosporium
putredinis (Vea lista de sinónimos en el trabajo de
estos autores). No hay evidencias que el clado P.
putredinis, puede ser virulento en los humanos, y al
parecer no exhibe ninguna especialización ecológica,
debido a que sus cepas se han aislado desde mate-
rial vegetal vivo, suelo, excrementos y detritus vege-
tales, su temperatura máxima de crecimiento es de
37°C.(Lackner & de Hoog 2011).
Gr aphium se car acteriz a por presen tar
conidióforos ramificados, especialmente en el ápice
de su sinema de color aceituna-marrón (Fig. 4), que
termina en un conj unto apretado de células
conidiógenas (anélides) delgadas en cuyo ápice se
acumulan los conidios en una masa mucoide. Su
conidiogénesis es similar a la de Scedosporium, pero
sus células conidiógenas son más pequeñas y los
conidios más estrechos y menos pigmentados (de
Hoog et al., 2000). Este sinanamorfo no siempre está
presente en los cultivos (Vea Tabla 1).
La familia Microascaceae incluye otros géne-
ros qu e son mor fológicam nete simila res a
Pseudallescheria (von Arx y col., 1988). Entre los
que también presentan anamorfos en Scedosporium
y Graphium, como el género Petriella Curzi (Fig. 5. A-B),
que se distingue principalmente por presentar ascomas
ostiolados (peritecios). Von Arx (1973), sugirió que
la presencia o ausencia de aberturas en los peritecios
podría estar influenciada por las condiciones cultura-
le s, situación demostrada poster iormente por
Issakainen et al., (1997, 1999) y Rainer y de Hoog,
2006) a par tir de sus estudios moleculares basados
en los genes 18S y 28S del ADN ribosómico (ADNr).
Dichos est udios dete r m inaron que Petri e lla y
Pseudallescheria son géneros genéticamente bien di-
ferenciados.
Aunque son varias las especies de Scedos-
porium de importancia clínica, sólo las más comu-
nes (4-5) per miten su descripción con apor tes
morfofisiológicos útiles en la rutuina primaria del la-
boratorio micológico (Gilgado et al., 2008).
Conocemos que el complejo Pseudallescheria
concentra el mayor número de cepas clínicas en la
liter atura e incluye patógenos ambientales con
anamorfos en Scedosporium y Graphium.Varias
especies de Pseudallescheria y Scedosporium, se
consideran organismos indicadores de contaminación
en el suelo y las aguas, mientras que la temperatura
y la dependencia de ciertas condiciones ambientales
aumentan la distribución de estos opor tunistas, en
especial del complejo Scedosporium dehoogii, en
suelos enriquecidos con hidrocatburos alifáticos (Ulfig
et al., 2008; Kaltesis et al., 2009; Eggertsberger, et
al., 2010).
La morfología del conidióforo y de los conidios
sésiles y la apariencia de las colonias en PDA son las
caracteríasticas más útiles para separar fenotipicamente
las diferentes especies en los diferentes clados. Ninguno
de los aislados que corresponden a S. apiospermum y
S. dehoggii desarrollan el teleomorfo después de 2
meses, mientras todos ellos desarrollan el anamorfo en
Scedosporium. Los conidióforos sinematosos (anamorfo
en Graphium ), son usualmente ausentes en S. dehoggii,
sin embargo, ellos se presentan en un 90% en S.
apiospermum. S.dehooggii, se caracteriza por
conidióforos solitarios y usualmente no ramificados,
subhialinos a gris pálidos y de paredes finas, conidios
B
Figura 5. A. Petriella setifera. Peritecio y ascosporas,
B. Ascosporas de Petriella guttulata (Tomado de:
website. nbm-mnb.ca)
10 µm 10 µm
A
Figura 4. Graphium sp. sinanamorfo del complejo
Pseudallescheria/Scedoaporium
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sésiles y colonias gris pálido, mientras los miembros
d e S.apiospermum muestran conidióforos ramificados,
y conidios sésiles cafesosos de paredes gruesas y
colonias cafesosas (Gilgado et al., 2008). El uso de
biodisel permite un mejor aislamiento de S. dehoogii
y S. deficiens, mientras S.aurantiacum es común en
áreas cálidas y áridas (Rodriguez -Trudela, 2009).
Petriella y Petriellopsis africana, se ailan
mayoritariamente de excrementos de herbívoros y
suelo, salvo excepciones y parece poco probable su
oportunismo en vertebrados (Lackner & de Hoog, 2011).
Varios casos clinicos en animales, atribuibles
a cepas de Graphium,se asocian a cepas posiblemente
mal identificadas de Graphium eumorphum, debido a
que en los casos que se han podido est udiar
molecularmente son similares o idénticas a P. boydii
o P.apiosperma (Lackner & de Hoog, 2011).
Aquellas especies relacionadas con los Ophios-
tomatales con una morfología aparente de Graphium,
residen en Pesotum, En contraste, Graphium fue
redefinido para incluir todas las especies sinematosas
en las Microascales, incluyendo las per tenecientes
a los complejos G. penicillioides yG. putredinis
(Okada et al. 1998, 2000). Los agregados en G.
putredinis son filogenéticamente relacionados con las
especies de Para scedosporiu m ,Petr iella,
Pseudallescheria yScedosporium que son oportu-
nista en humanos (Issakainen et al. 1999, de Hoog
et al. 2000, Okada et al. 2000, Gilgado et al. 2007).
Las especies de Graphium, muestran estre-
cha asociación con los escarabajos de la corteza,
salvo un caso clínico de G. basitruncatum en una
leucemia (Kunart et al.2007), mientras Parasce-
dosporiun putredinis (=Gra-phium putredinis), pare-
ce no exhibir ninguna especialización ecológica
(Lackner & de Hoog (2011).
Es esencial en laboratorio micológico clínico la
recuperación de los datos más recientes en la litera-
tura, para el entendimiento del complejo
Pseudallescheria/Scedosporium. En 2002, un grupo
amplio de investigadores Europeos se asociaron para
compartir estudios sobre este grupo de hongos bajo
el paragua de la European Confederation of Medical
Mycology (ECMM) (www. scedosporiumecmm.com).
Una iniciativa similar fue seguida en Australia por
The Aus tralian Scedosporiu m Stu dy Gr oup
(AUSCEDO), ambos grupos fueron intena-cionalizados
bajo el auspicio de la International Society of Human
and Animal Mycology (ISHAM). Los objetivos gene-
rales de estos grupos de trabajo son los de obtener
un mejor conocimiento en la epidemiología y variabi-
lidad genética de estos hongos, como provever datos
de posibles fuentes de contaminación y rutas de in-
fección, así como ofrecer la ayuda necesaria para la
identificación molecular de los integrantes de este
complejo (De Hoog et al., 2011).
El aporte de las técnicas moleculares
La taxonomía del complejo se ha modificado
drásticamente desde la aplicación de la biología
molecular, en par ticular por los ar tículos de Gilgado
et al. (2005-2008-2010), una situación que permitió
subdividir la clásica especie de Pseudallescheria
boydii en numerosas especies, varias de las cuales
son indistinguibles fenotípicamente con los métodos
en uso en la actualidad.
Scedosporium apiospermum fué considerado
tradicionalmente el anamorfo de Pseudallescheria
boydii, sin embargo, recientes estudios moleculares
han demostra-do que son 2 especies difrerentes, de-
bido a que S.apiospermum es una especiea hetero-
tálica y su teleomorfo es Pseudallescheria apiosper-
ma (Gilgado et al., 2008).
Se observa que en los últimos decenios, la
literatura presenta una amplia variación de técnicas
moleculares para tipificar los aislados del complejo
Pseudallescheria/Scedosporium y sus relativos
(Issakainen et al.,1997; Gilgado et al., 2005-2008-
2010; Harun et al., 2009b; Lackner et al., 2010;
Lackner & de Hoog, 2011; Lu et al., 20011), las cuales
han permitido discriminar entre las cepas, especi-ficar
posibles fuentes de infección, grados de virulencia o
determinar la actividad frente a los antifúngicos (San
Millan et al., 1997; Gilgado et al., 2006; Guarro et al.,
2006; Delhaes et al., 2008).
Los métodos moleculares más discriminatorios
para especies de Scedosporium son: AFLP, RAPD,
PCR y PCR de secuencia entre repeticiones simples
(ISSR-PCR) (San Millan et al., 1997; Ruiz-Diez et al.
1997; Solé et al., 2003; Delhaes et al., 2008; Lackner
et al., 2011-2012). Dichos análisis han mostrado
diversos grados de variación genética, incluso en
algunos se han obtenido resultados contradictorios
por las infuencias de varios factores (diferencias en
los métodos y marcadores utilizados, cepas no
representativas o el limitado número de aislados
estudiados (San Millan et al., 1997; Ruiz-Diez et al.
1997; Solé et al., 2003; Delhaes et al., 2008; Perdomo,
2011). También se ha usado la electroforesis
enzimática de multilocus (MLEE) (Zouhair , et al.,
(2001), así como varios genes como la b-tubulina
(Gilgado et al., 2005-2008), la calmodulina (Gilgado
et al., 2005), la EF1a (Zeng et al., 2007), los cuales
presentan una considerable variabilidad genética.
Ultimamente, sumándose a estos métodos se ha
empleado un robusto sistema de multilocus Sequence
Typing (MLST), que provee un buen método de
diferenciación de cepas debido a que los metodos
fenotípicos convencionales tienen limitado uso para
fines epidemiológicos, por ser inadecuadamente
descriminatorios (Harun et al., 2009a). Para el grupo
de investigadores Lackner et al, (2010); Lackner & de
Hoog (2011), De Hoog et al., 2011). Las secuencias
de ITS, la B tubulina 2 y los locus TBC de la B-tubulina,
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son suficientes para delimitar las especies del complejo
Pseudallescheria/Scedosporium. Recientemente la
espectrometría de masa se está imponiendo como otro
método confiable y rápido para la identificación de este
complejo, así como de otros hongos y bacterias (Krasny
et al., 2011; Sitterle et al., 2012), así como el tipiado
fisiológico de las cepas mediante el «Taxa Profile MICRO-
NAUT system», un sistema semi automático asistido
por computador (Horre et al., 2011).
Diagnóstico de laboratorio
En la mayoría de los casos el hongo se aisla
desde cultivos de esputo, de especímenes quirúrgi-
cos o lavado bronquial . A. fumigatus también puede
encontrarse asociado en el pulmón, una situación fre-
cuente y que puede enmascarar el diagnóstico por su
crecimiento más rápido que el complejo Pseudal-
lescheria/Scedosporium y es de utilidad un test de
precipitinas que reacciona fuer temente con el primer
agente y una débil reaccion con A.versicolor. A pesar
de, la utilidad del cultivo de esputo y el empleo de
inmmunoprecipitinas en el suero a veces es necesario
una muestra por extirpación quirúrgica para el diagnósti-
co. (Bonduel et al., 2001; Kantarcioglua, et al., 2012)
El cultivo en agar papa dextrosa es el medio
más empleado para su determinación morfológica,
pero no debemos olvidar que las cepa s de
Scedosporium son de lento crecimiento si e compa-
ran con otros hongos saprófitos oportunistas como
los Aspergillus (7 a 10 días versus 2 a 4 días, respec-
tivamente), para producir colonias que esporulan. Esto
permite considerar el subdiagnóstico de las espe-
cies de Scedosporium en pacientes con fibrosis
quística, donde la colonización de los pulmones es
concomitante con A. fumigatus (Blyth et al., 2010).
La histopatología muestra hifas con multiples
ramificaciones en ángulo agudo o dicotómicas, tam-
bién suele observarse la presencia de clamidosporas
globosas terminales o intercalares, de hasta 20 um
de diámetro (Fessler & Brown, 1989; Walts, 2001).
Es recomendable depositar el material vivo ob-
tenido en uno de los centros reconocidos de colec-
ción para posteriores estudios (ej. CBS).
Medios de cultivo específicos
Rainier et al. (2008), desarrollaron un medio
semi selectivo para el eislamiento de P.boydii y es-
pecies relacionadas despues de 5-7 días a 36-37°C,
que denominaron Scedosporium selective Agar
(SceSel+), cuya composición es la siguiente. Extracto
de malta, 6.25 g; maltosa, 6.25 g; monofosfato de
potasio, 1.25 g; extracto de levadura,1.0 g; Sulfato
de magnesio 7 H2O, 0.625 g; peptona de soja, 0.625
g; cloramfenicol, 0.1 g (diluido en 5 ml d etanol al
96%); ciprofloxacino, 0.1 g (diluido en 1 ml de NaOH
a 1M y agregado al agar a 5 5°C; Sulfato de
estreptomicina, 0.1 g (diluido en 5 ml filtrada en filtro
estéril y agragado al agar a 55°C); dichloran, 2 mg
(diluido en 1 ml en una solución al 0,2 de etanol); benomy
l,6 mg (diluido en 5 ml de etanol y agregado al agar a
55°C); agar, 20 g; y agregar 983 ml.de agua destilada. Si
se emplea este medio sin el benomyl (SceSel– ), A. fu-
migatus no se inhibe y tiene un crecimiento mayor. En
este medio el efecto selectivo de nivel de germinación
es alto pudiendo llegar a cifras cercanas al 90%, mien-
tras en los medios no selectivos (PDA, SGA y MEA , los
niveles no sobrepasan el 50%.
El aislamiento de fuentes ambientales con el
medio SceSel+ es muy exitoso, confirmando que el
impacto humano en los suelos favorece la frecuencia
del complejo Pseudallescheria/Scedosporium. Puede
emplearse también el medio agar Rosa de Bengala
Cloramfenicol suplementado con benomil a una con-
centración de 10 ml (Harun et al., 2009a). Debe des-
tacarse que S. prolificans difiere de P. boydii por su
capacidad de crecer en DG18, este medio puede ser
usado para su rápida separación cuando no se em-
plean métodos moleculares (Rainier et al., 2008).
Figura 6. Colonia de Scedosporium apiospermum, en
PDA,14 días a 30°C (Dea Garcia Heermoso, CNRMA
Institut Pasteur, Scedosporium meeting, Bonn, 2010).
Figura 7. A-B, Colonia deScedosporium prolificans
(Anverso y reverso) en PDA durante 7 días a 30 °C.
Descripción morfofisiológica de algunos taxa
comunes en cuadros clínicos diversos o aislados
desde el ambiente.
AB
El complejo Pseudallescheria/Scedosporium y taxas afines en la rutina del laboratorio micológico clínico - E.Piontelli.
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1. Pseudallescheria boydii (Shear)McGinnis, A.A,Padhye & Ajello
Anamorfo Scedosporium boydii (Shear) Gilgado, Gené, Cano et Guarro.
Colonias flocosas o lanosas de crecimiento relativamente rápido, 30-
45 mm en PDA a los 14 días a 25°C. Ascomata cleistotecial (Figura 8 A),
inmersos o superficiales, 50-200 µm diám., textura epidermoidea, negros,
paráfisis ausentes; ascos evanescentes, unitunicados obovoides a redondos,
12-18 x 9-14 µm, Ascosporas amarillentas a café claro con un poro germinal
en ambos extremos, unicelulares, elipsoidales a fusiformes, lisas, 6-9 x 5-6
µm (A). Anamorfo en Scedosporium con conidios húmedos sobre células
conidiógenas anelídicas (percurrentes), en el micelio aéreo, subhialinos a
café, subesféricos a elongados, 6-11 x 3,5-6 µm (B), que se tornan café y de
paredes gruesas al liberarse. Otros conidios sésiles nacen desde hifas
vegetativas, abundantes, esféricos o subesféricos 5-7 x 5-6 µm (C). A veces
presencia de un sinanamorfo en Graphium con estipe cilíndrico, liso, conidios
en células conidiógenas anelídicas, subhialinos o café pálidos, reunidos en
substancia mucoide, ampliamente clavados 6-12 x 3,5-4 µm. Distribución
universal. Referencias Gueho & de Hoog, 1991; De Hoog et al., 2000; Gilgado
et al., 2007-2010)
Un pequeño porcentaje de cepas produce espontaneamente ascomas,
sin embargo, su formación puede ser estimulada en medios pobres como
agar maíz, agar avena o agar papa zanahoria, en 2-3 semanas. P.boydii no
crece en agar DG18 (baja actividad de agua) y esto permite diferenciarlo de
Scedosporium prolificans que crece en este medio). El patrón de asimila-
ción de P. boydii,P.angusta,P. ellipsoidea y P. fusoidea son similares, sin
diferencias significativas. La asimilación de sucrosa, maltosa, D-ribosa, L-
arabinitol y ribitol, así como el crecimiento a 40 y 45°C permite disciminar
entre las especies (Gilgado et al., 2005). Vea Tabla 2.
2. Pseudallescheria apiosperma Gilgado, Gené, Cano et Guarro.
Anamorfo Scedosporium apiospermum (Sacc.) Castellani & Chalmers
Colonias de crecimiento relativamente rápido, 35-55mm en PDA a los
14 días a 25°C, blancas grisáceas con un reverso gris a negro. Células
conidiógenas cilíndricas hialinas que nacen de hifas indiferenciadas unicas o
ramificadas, que producen numerosos conidios café pálidos, ampliamente
clavados a ovoides, 4-9 x 6-10 µm (Fig. 9 A), redondeados en sus extremos y
con base trunca, solitarios, en pequeños grupos o lateralmente directamente
en las hifas. El desarrolo conidial se describe como anelídico, una situación
difícil de observar al microscopio. En el tiempo, un sinanamorfo en Graphium
puede observarse frecuentemente en los extremos de las colonias, con
conidióforos cilíndricos, café oliva, lisos, que termina en un racimo de células
conidiógenas anelídicas delgadas, con conidios subhialinos o café pálidos
reunidos en substancia mucoide, ampliamente clavados, 6-12 x 3,5-4 µm
(B). Distribución universal. Temperatura óptima de crecimiento, 30-37C.Vea
Tabla 2.
Los miembros del clado S.apiospermum, son morfológicamente
indistinguibles del anamorfo de Pseudallescheria boydii, y taxas asociados,
pero pueden separarse por la respuesta del test de la D-ribosa y por la ausencia
de teleomorfo (Tabla2).
Debido a que el teleomorfo no se observa en los aislados de S.
apiospermum, se aparearon un buen número de aislados en todas las posibles
combinaciones. Varias de éstas producen ascomata fértiles típicos del género
Pseudallescheria, mientras todos los aislados solos fueron autoestériles. Se
pudo agrupar los aislados en dos tipos diferentes de cruzanmiento: los
cruzamientos entre la progenie de ascosporas F1, demonstró un sitema de
apareamientoa bi-alélico heterotálico. Vea Gilgado et al., 2010.
3. Pseudallescheria minutispora Gilgado,Gené, Cano & Guarro
Anamorfo Scedosporium sp., Graphium sp.
10µm
B
C5 µm
A
10µm
AB
Figura 8. A-B-C, Pseudallescheria
boydii. A. Clestotecio con ascosporas,
B. Conidios del anamorfo desde célu-
las conidiógenas anelídicas, C. coni-
dios sésiles desde hifas vegetativas.
Figura 9. A-B, Scedosporium apios-
permum, A. Conidios desde células
conidiógenas anelídicas, B.Graphium
sp.sinanamorfo, células conidiógenas
conidios y sinema.
µm µm
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Colonias de crecimiento relativamente rápido (50-57 mm a los 14
días en PDA a 25°C, algodonosas a lanosas, gris naranja a combinado
con áreas gris café; ascomata abundantes en agar avena 50-150 µm
diám., (Homotálico).perido de textura epidermoidea, gris amarillento a
cafesoso-gris, recubierto a veces por hifas café de paredes gruesas.
Ascos (8 esporas) esféricos a subesféricos, 12-15 x10-13 µm, evane-
scentes, ascosporas unicelulares, con un poro germinal en ambos
extremos, elipsoides, 5-7x3-4 µm (A), usualmente con una gota de acéite.
C o n i d i o s d e Scedosporium obovoidales, elipsoidales a subclaviformes 6-
11 x 3-4 µm (B), lisos, subhialinos sobre conidióforos escasamente
ramificados. Conidios de Graphium, cilíndricos a claviformes, de base
trunca, 5-14 x 2-4,5 µm, sobre sinnemata erecto de 180-300 µm de largo
Conidios en hifas vegetativas escasos, elipsoidales o obovoides 7-10 x
3,5-5 µm.usualmente sésiles, subhialinos,lisos de paredes gruesas.
Temperatura óptima 25 a 30°C, crecimiento máximo 40°C°, pero puede
crecer hasta 42°C. Distribución Bélgica, España.(Gilgado et al., 2005).
4. Pseudallescheria fusoidea (Arx)McGinnis, A.A.Padhye & Ajello
(= Petrellidium fusoideum).Anamorfo Scedosporium sp., Graphium sp.
Colonias de crecimiento moderadamente rápido en 14 días en PDA
a 25°C, 69-70 mm; grises a café pálido. Ascomata 50-160 µm diám.
Ascos abovados a esféricos 12-15 x 10-12 um. Ascosporas ampliamente
fusiformes, atenuadas en ambos extremos por poros germinales, 6-7,5
(-9) x 4-4,5 µm (Fig. 11. A). Conidios de Scedosporium, 6-7 (-9) x 2,5-
4,5 µm (B); conidios en hifas vegetativas abundantes, esféricos a
subesféricos, 4-7x 4-5µm. Sinanamorfo en Graphium raramente presen-
te,con conidios de 4-7 x 4-5 µm.
Filogenéticamente P. fusoidea y P. angusta son especies muy
relacionadas, sin embargo, P. angusta muestra ascomata pequeños (hasta
110 µm en diám,) y ascosporas angostas (3 - 3.5 µm de ancho versus
4-4,6 µm en P. fusoidea); además las colonias de P. angusta son más
pequeñas (52 a 54 mm en 14 días en PDA a 25°C).Vea: Von Arx et al.,
1988; Gilgado et al., 2005; Guarro et al., 2012.
5. Scedosporium aurantiacum Gilgado, Cano, Gené, et Guarro.
Colonias en PDA , 40 a 50 mm después de 14 días a 25°C,
algodonosas o lanosas especialmente en el centro, frecuentemente con
anillos con-céntricos de micelio aéreo de diferentes colores, amarillo-gris
con áreas grises a cafesosas, reverso cafe naranja al centro. Todos los
aislados producen un pigmento difusible amarillo claro en PDA o agar
avena después de unos pocos días de incubación. Conidióforos solitarios
en el micelio aéreo o en grupos formando sinnemata (Graphium)
frecuentemente en la superficie del agar. Conidióforos a menudo reducidos
a células conidiógenas que crecen lateralmente en un micelio
indiferenciado o ramificado, usualmente presentando verticilios de 2-3
células conidiógenas. Se observan 3 tipos de conidios. a) los producidos
en conidióforos solitarios, subhialinos, de paredes lisas obovoides o
subcilíndrico, 5 -14 x 2 - 5 µm (Fig. 12); (b) Los producidos en sinnemata,
predominantemente cilíndricos o claviformes, 6 -12 x 3 -5µm con una
amplia base trunca,(c) los que se producen en hifas indiferenciadas,
sésiles, solitarios, laterales, café, lisos y de paredes gruesas usualmente
obovoides, 6 -10 x 3 - 5 µm. Estos últimos se producen abundantemente
en todos los aislados. Teleomorfo desconocido. Optima temperatura 37-
40°C. Máxima temperatur a 45°C. No crece a 50°C.(Vea Gilgado et al.,
2005)
6. Complejo Scedosporium dehoogii Gilgado, Cano, Gené et Guarro,
Clado 3 sensu Gilgado et al. (2008).
Las colonias en PDA alcanzan un diámetro de 45 a 60 mm a 25°C
A
Figura10. A-B .Pseudoallescheria
minutispora, A. Ascosporas con poro
germinal en ambos extremos, B. Conidios
del anamorfo.
Figura 12. Scedosporium aurantiacum.
Conidios en conidióforos solitarios.
AB
5 µm
Figura11. A-B.Pseudoallescheria fuso-
idea, A. Ascosporas con poro germinal en
ambos extremos, B. Conidios del ana-
morfo.
5 µm
5 µm
10 µm
B
10 µm
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después de 14 días. Algodonosas, blancas a gris pálido con reverso incoloro;
conidióforos solitarios son usualmente reducidos a células conidiógenas,
subhialinas, de paredes lisas. usualmente cilíndricas 6 -50 x 1-1,5 µm, que
producen conidios café pálidos, obovoides o elipsoidales, 6 - 11 x 4 -5 µm.
Conidióforos sinematosos erectos, 80-450 µm de largo, que terminan en una
cabeza mucosa de conidios. Conidios cilíndricos o claviformes, 6 -11 x 3 - 4
µm (Fig. 13 B), de base trunca. Conidios sésiles subhialinos a gris pálido, de
paredes delgadas, mayormente abovados, 5 - 8 x 5- 6 µm (A). No se observa
teleomorfo en ninguno de los aislados después de 2 meses de cultivo. Máximo
crecimiento a 37°C (5 a 10 mm en diám. en 14 días). El hongo puede
asimilar ribitol, L-arabinitol, sucrosa y maltosa, pero no D-ribosa (Tabla
2).Gilgado et al., 2008)
Este hongo es común en el ambiente, sin ambargo un número reducido
de casos se han reportado en la literatura . Agunas cepas de S. dehoogii
difieren de la especie tipo en las secuencias de ITS. Estas cepas se agrupan
en 2 clados en las secuencias de ITS, así como en el gen de la b-tubulina
(BT2). Las diferencias se encontraron también en los rangos de crecimiento
en agar polivinil alcohol agar suplementado con diesel, aceite de semilla de
colza o sin suplemento, en la apariencia de las colonias en los medios que
contienen aceite y su crecimiento a 41 °C en PDA. En base a esto se propuso
A
B
una nueva especie Scedosporium deficiens. Vea Rainer & Kaltseis (2010).
7. Scedosporium prolificans (Hennebert & B.G. Desai) E. Guého & de Hoog (=Scedosporium.inflatum, = Lo-
mentospora prolificans). Teleomorfo desconocido.
Las colonias de S. prolificans crecen rápidamente a 25°C y maduran en 5 días en agar Sabouraud. Textura
algodonosa y mucoide inicialmente, posteriormente se aplanan con presencia de mechones de micelio finos y
cortos. En su anverso las colonias son de un color gris claro a negruzco y se tornan gris negro a negro en la
madurez, con el reverso gris a negro (Fig.7, A-B). Presencia de hifas hialinas septadas y finas donde las células
conidiógenas se producen en su extensión. Células conidiógenas en forma de frasco, de base inflada que se
adelgazan hacia el ápice formando un largo cuello proliferante (anelídico). Conidios solitarios o en pequeños grupos
en el ápice de las anélides, de paredes lisas, hialinos a café pálido, ovoides a piriformes, de base trunca, 2 - 5 x 3
- 13µm (promedio 3,4 x 5,3 um) (Fig. 14 A-B) .
Las colonias de S. prolificans son oscuras si se comparan con S. apiospermum (Fig. 6) La células
conidiógenas infladas (anélides) y sus conidios levemente anchos de S.prolificans, así como su inhabilidad de
asimilar ribitol, xylitol, y L-arabinitol, permiten diferenciar las 2 especies. La diferenciación de ambas especies
puede efectuarse también mediante PCR o pruebas de hibridización.(Weddle et al.,1998; De Hoog et al., 2000).
Figura 14. A-B. Scedosporium prolificans. Células conidiógenas anelídicas y conidios
a diferentes aumentos.
A B
5 µm
5 µm
10 µm
Figura13. A-B, Scedosporium deho-
ogii. A Conidios sésiles, B. conidios
sobre células conidiógenas anelídicas
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Tabla 2. Diferenciación morfofisiológica entre especies del complejo Pseudallescheria/Sce-
dosporium y S. prolificans en PDA a 25ºC en 14 días (Gilgado et al., 2008)
Especie Célula Conidio Reverso Pigmento Rib. L-Arab. Sucr. Malt. D-Rib 40ºC 45ºC
conidiógena sésiles colonia difusible
tono amarillo
P. boydii y Cilìndrica Glob- subglob. - V + + + + + + -
relativos* pared gruesa
P. minutispora Cilìndrica Elips-obovoide - - + + + - - + -
pared-delgada
S.apiospermum Cilíndrica Glob-subglob. - V + + + + - + -
Pared gruesa
S. aurantiacum Cilìndrica o Obovoide
complex ligeramente Pared gruesa + + + + - + + + +
forma de frasco
S. dehoogii Cilíndrica o Obovoide - - + + + + - - -
ligeramente pared delgada
forma de frasco
S. prolificans Forma de frasco Glob-subglob. - - - - - + - + V
pared gruesa
Tabla 1.- El complejo Pseudallescheria y taxa relacionados en las Microascales
(Adaptada de: Lackner et al., www.scedosporium-ecmm.com/.../Lackner2_3rd... 2010 y Lackner & De Hoog, 2011)
Género y Ambiente Teleomorfo Anamorfo Sinanamorfo
Pseudallescheria boydii Scedosporium boydii Graphium sp.
Pseudallescheria apiosperma Scedosporium apiospermum Graphium sp.
Pseudallescheria Pseudallescheria minutispora Scedosporium sp. Graphium sp.
(Oportunista) Pseudallescheria desertorum Scedosporium sp -----------
--------------------------------- Scedosporium aurantiacum -----------
--------------------------------- Scedosporium dehoogii -----------
--------------------------------- Scedosporium deficiens -----------
Parascedosporium Parascedosporium putredinis* Semejante a scedosporium Graphium sp.
(Sin tendencia)
Sc. prolificans -------------------------------- Scedosporium prolificans ------------
(Oportunista)
Petriellopsis Petriellopsis africana Scedosporium sp. Graphium sp.
(Suelo y excrementos) Petriella guttulata Scedosporium sp. ----------
Petriella Petriella setifera Scedosporium sp. ----------
(Suelo, excrementos) Petriella sordida Scedosporium sp. ----------
------------------------------- Scedosporium lesnei Graphium sp
Graphium basitruncatum ------------------------ ------------
Graphium Graphium penicillioides ------------------------ ------------
( Escarabajos de Graphium laricis** ------------------------ ------------
la corteza) Graphium pseudomictrum** ------------------------ ------------
Graphium fimbrisporum ------------------------ ------------
Lophotrichus Lophotrichus fimetii Scedosporium sp. ------------
Parapetriella Parapetriella lindforsii Scedosporium sp. ------------
*(Incluye: Graphium laricis, Graphium putredinis, Parascedosporium tectonae, Rhinocladium lesnei. Lackner & De Hoog,
2011) **Graphium laricis y G. dormiticum son morfológicamente y molecularmente casi idénticos, pero con distintos ambientes
ecológicos (Okadaet al., 1998; Kirschner, 1998)
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mediante características morfológicas. Abreviaciones Rib. = Ribosa, L.arab. = L-Arabinosa, Sucr. = Sucrosa, Malt. = Maltosa, D. Rib. =
D-Ribosa.. El signo V corresponde a variable. El signo (-) respuesta negativa y el signo (+) respuesta positiva.
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