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Research Paper 研究报告
微生物学报 Acta M icrob iologica Sinica
50(7):870 - 875 ;4 July 2010
ISSN 0001 - 6209 ;CN 11 - 1995 / Q
http:/ /journals. im. ac. cn / actamicrocn
基金项目:“
十一五”
国家科技支撑计划项目(2007BAD89B13);国家高技术研究发展计划(863 计划)(2006AA10Z426)
*通信作者。Tel:+ 8 6-10 -8210621 2;E-mail:Bqfan@ caas. ac. cn
作者简介:王洪媛(1976 - ),
女,
山东莱州人,
助研,
博士,
主要从事农业微生物资源与利用的研究。E-mail:wanghy@ caas. ac. cn
收稿日期:2009 -12-03;修回日期:2010-04-19
三株高效秸秆纤维素降解真菌的筛选及其降解效果
王洪媛,
范丙全*
(中国农业科学院农业资源与农业区划研究所,
北京 100081)
摘要:【
目的】
利用多种筛选方法,
获得高效秸秆纤维素降解真菌,
并研究其秸秆纤维素的降解能力。【
方法】
采用滤纸片孔洞法、
滤纸条降解法、
羧甲基纤维素钠(CMC-Na)水解圈测定法、
秸秆失重法、
纤维素分解率测
定法、
胞外酶活测定法等常规秸秆纤维素降解菌的筛选方法。 【
结果】
筛选到 3株具有较强纤维素降解能力
的真菌菌株,
经初步鉴定菌株 98MJ 为草酸青霉(Penicillium oxalicum )、
菌株 W3 为木霉(Trichoderma sp . )、
菌
株W4 为扩张青霉(Penicillium expansum)。菌株 W4 具有非常强的秸秆纤维素降解能力,10 d 内对秸秆的降
解率可达 56. 3% ,
对纤维素、
半纤维素和木质素的分解率分别为 59. 06% 、78. 75% 和33. 79% 。菌株 W4 的
胞外纤维素酶活力在 14. 25 - 49. 75 U / mL 之间。【
结论】
筛选获得 3株高效秸秆纤维素降解真菌菌株,
其中
菌株 W4 的纤维素酶活高于已报道的菌株,
是一株十分具有研究开发潜力的纤维素酶生产菌株。
关键词:秸秆纤维素;降解菌;筛选;纤维素酶
中图分类号:Q935 文献标识码:A文章编号:0001-6209 (2010)07 -0870-06
农作物秸秆是自然界蕴藏最丰富的可再生资
源。秸秆纤维素的生物转化近些年受到了广泛关
注,
大规模纤维素生物转化工艺的发展,
将有效解决
或减轻食品和动物饲料的不足、
废弃物处理、
矿石燃
料依赖性等一系列问题[1]。自然界中能够降解纤
维素 的 微 生 物 很 多[2 - 3 ],
如:担 子 菌:虫 拟 蜡 菌
(Ceriporiopsis subvermispora ); 木 腐 菌:粉孢革菌
(Coniophora puteana )和地窖粉孢 革菌 (Coniophora
cerebella ); 半知菌:康 宁 木 霉 (Acrostalagmus
koningii)和里氏木霉 (Trichoderma reesei )等。然而
目前所应用和研发的菌株仍然存在着秸秆纤维素降
解能力低、
活性不稳定、
产酶成本高、
作用 pH 范围
狭窄等问题。因此,
获取高效降解秸秆纤维素的微
生物菌株及其制剂的应用是解决秸秆问题的关键技
术。
目前我国科研工作者在筛选秸秆降解菌的过程
中,
主要采用的方法有:滤纸片孔洞法、
滤纸条降解
法、
羧甲基纤维素钠水 解圈测定法、
胞外酶 活测定
法、
滤纸或秸秆失重法、
秸秆纤维素分解率测定法
等。本研究的主要目的是要综合利用这些方法筛选
获得高效秸秆纤维素降解菌并研究其纤维素酶的活
力,
同时期望找到一套能够有效获得高效秸秆纤维
素降解菌的筛选方法。
1材料和方法
1. 1 材料
1. 1. 1 样品:采集自东北漠河、
北京郊区的森林、
农
田土壤、
腐烂的秸秆、
腐烂的木材以及堆肥中。
1. 1. 2 主要试剂仪器:DNS 试剂,
柠檬酸缓冲液,
水
杨素(Sigma 公司),
羧甲基纤维素钠(国药集团化学
试剂有限公司);新华定性滤纸;秸秆木质纤维素的
制备:将小麦秸秆剪成 2 - 3 cm 小段,
烘干后粉碎至
王洪媛等:三株高效秸秆纤维素降解真菌的筛选及其降解效果. /微生物学报(2010)50 (7)
60 目,
加入 2 % 的氢氧化钠溶液 至固液 重量比为
1∶ 4,
在85 ℃ 水浴中处理 1 h,
水洗至 pH 为中性,
烘干备用。秸秆木质纤维素中的纤维素、
木质素和
半 纤 维 素 的 含 量 分 别 为 39. 57% 、34. 83% 和
24. 77% 。
1. 1. 3 培养基:(1)赫奇逊氏(Huchinson )无机盐
培养基:KH2PO41. 0 g,NaCl 0. 1 g,MgSO4·7H2O
0. 3 g,NaNO32. 5 g,FeCl30. 01 g,CaCl20. 1 g,
水
1000 mL,pH7. 2 左右。(2)滤纸培养基:赫奇逊氏
无机盐培养基中添加琼脂粉 18 g / L,
倒好平板后铺
一片三角滤纸片在培养基上。(3)CMC-Na 平板培
养基:CMC-Na 10. 0 g,200 g 去皮马铃薯汁1000 mL,
琼脂 18 g,
加蒸馏水至 pH7. 2 左右。(4)种子培养
基:采用马铃薯 -蔗糖琼脂(PDA )培养基。(5)液
体发酵培养基:KH2PO41. 0 g,NaCl 0. 1 g,MgSO4·
7H2O 0. 3 g,NaNO32. 5 g,FeCl30. 01 g,CaCl20. 1 g,
秸秆木质纤维素 20 g 或滤纸条 10 g,pH 为7. 2 -
7. 4。
1. 2 滤纸片孔洞法富集初筛秸秆纤维素降解菌
采用滤纸片孔洞法进行秸秆纤维素降解菌的初
筛:用无菌水浸泡采集的土壤、
腐烂的秸秆及木材等
样品,
在摇床振荡 30 min,
取样品悬液,
用无菌水稀
释成 10 - 1 、10 - 2 、10 - 3 的浓度梯度,
吸取稀释浓度为
10 - 3 的稀释液,
涂在滤纸培养基上,
置于 28 ℃ 培养
箱中培养 24 - 48 h,
挑选出在滤纸培养基上生长良
好,
且有降 解 孔 洞 出 现 的 真 菌 菌落,
并进一步在
PDA 培养基上进行分离纯化,
将分离纯化后的菌株
斜面接种于种子培养基上培养 2 - 4 d,
后置 4 ℃ 冰
箱冷藏、
待用。
1. 3 CMC-Na 水解圈测定实验
将初筛菌株接种至 CMC-Na 平板培养基,
培养
2 - 5 d,
用0. 1% 的刚果红水溶液浸染 30 min,
弃染
液,
再用 1 mol / L 的NaCl 水溶液脱色 1 h,
测菌落直
径(d,cm)和水解圈直径(D,cm),
采用 DP表示水解
能力:DP=(D / d)2。
1. 4 滤纸降解实验
将初筛 获得的 菌 株,
置于 液 体 种 子培养基 中
28℃ 摇床培养 5 d 制备菌液。在40 mL 的赫奇逊氏
无机盐培养基中加入 1 × 6 cm 的滤纸条,
接入 1 mL
菌液进行 恒温 震荡 (为避免由于震荡造成滤纸断
裂,
并满足菌株生长所需的有氧条件,
本实验采用的
摇床转速为 70 r / mim )培养 8 d,
根据滤纸条的断裂
程度判断降解效果:( +)为滤纸边缘膨胀;( + + )
为滤纸整齐膨胀并弯曲;( +++)为滤纸不定形;
(+ + + + )为成团糊状;( +++++)为半清状。
1. 5 秸秆失重的测定
接种筛选菌株到液体种子培养基中制备菌液,
接种 1 mL 制备好的菌液到含有 2% 秸秆木质纤维
素的液体发酵培养基中,
进行恒温震荡培养,
在培养
10 d 后,
用滤纸过滤发酵液,
将残留物 80℃ 烘干称
重,
用减重法计算出麦秸失重率。
1. 6 秸秆分解率的测定
采用王玉万 等[4]的方法进行纤维素、
半纤维
素、
木质素含量的测定。纤维素的分解率根据下式
计算:
(对照样品纤维素含量 ×样品重量-
残体纤维素
含量 ×残体重量)/(对照样品纤维素含量 ×样品重
量)× 100 %
半纤维素和木质素的分解率的计算方法除了将
纤维素含量进行相应的替换外,
其它的都如上式所
示进行计算。
1. 7 纤维素酶活测定
纤维素粗酶液的制备:接种环挑取在 PDA 上培
养的新鲜菌丝于液体种子培养基中,28℃ ,
170 r / min 培养 60 h,
用血球计数板在显微镜下观察
孢子的生长情况,
按1% (108个孢子量)的接种量到
300 mL产酶培养基中,28℃ ,170 r / min 液体发酵培
养,
每24 h 取样测定纤维素的酶活力,
将培养好的
液体发酵产酶培养基先用两层纱布过滤,
滤液再于
4℃ ,10000 × g 离心 10 min,
取上清液即为制备的粗
酶液。
全酶活 (FPase)的测定[5]:取适当稀释后 的酶
液0. 5 mL,
加入到含有 50 mg 处理过的无淀粉新华
滤纸和 1. 5 mL 0. 05 mol / L pH5. 0 柠檬酸缓冲液的
具塞刻度试管,50℃ 水浴中保温1 h,
立即按 DNS 法
测定还原糖含量。
外切酶活(exo-1 ,4-
β-D-glucanase,CBH /Cex )的
测定[6]:取适当稀释后的酶液 0. 5 mL,
加入到含有
50 mg 脱脂棉和 1. 5 mL 0. 05 mo l /L p H5. 0 柠檬酸
缓冲液的具塞刻度试管,50℃ 水浴中保温 1 h,
立即
按DNS 法测定还原糖含量。
内切酶活(endo-1,4-
β-D-glucanase,EG / Cen )活
力的测定[7]:取适当稀释后的酶液 0. 5 mL,
加入到
含有 1. 5 mL 1% CMC 柠檬酸缓冲液的具塞刻度试
管,50℃ 水浴中保温 30 min,
立即按 DNS 法测定还
178
Hongyuan Wang et al. / Acta Microbiologica S inica (2010 )50 (7)
原糖含量。
β-
葡萄糖苷酶(β-1 ,4-glucosidase,
β-Gase)活力
的测定[8]:取适当稀释后的酶液 0. 5 mL,
加入到含
有1. 5 mL 1 % 水杨苷醋酸缓冲液的具塞刻度试管,
50 ℃ 水浴中保温 30 min,
立即按 DNS 法测定还原
糖含量。
以上酶活力单位(U / mL)定义为:每mL 酶液在
上述反应条件下在 1 min 内使底物降解生成 1μmol
葡萄糖所需的酶量。酶活力的转换公式如下:
酶活力(U / mL)=
葡萄糖含量(mg)×酶液定容总体积(mL)× 5. 56
反应液中酶液加入量(mL)×时间(min)
5. 56 为1 mg 葡萄糖的 μmol 数(1 000 /180 = 5. 56 )。
1. 8 真菌菌落形态及生理生化测定
观察菌落和菌种形态特征,
并参照《
真菌鉴 定
手册》
和中国真菌志(第三十五卷)进行菌种鉴定。
1. 9 菌株的 ITS rDNA 序列鉴定
提取真 菌基因 组 总 DNA。扩 增 18 S rDNA 和
5. 8S rDNA 之间的保守序列,PCR 引物为 ITS1:(5′-
TCCGTAGGGAACCTGCGG-3′),ITS2:(5 ′-GCTGCGT
TCTTCATCGATGC-3 ′)。PCR 反应体系为 50 μL,
反
应条件 为:94℃ 5 min,94℃ 30 s,57℃ 50 s,72 ℃
50 s;循环 30 次;72℃ 10 min。
PCR 扩增产物测序后,
将获得的 DNA 序列,
输
入GenBank,
用Blast 程序与数据库中的所有序列进
行比较分析。利用 MEGA4. 1 进行系统发育树的构
建。
图1菌株 W4 的基于 ITS rDNA 序列同源性构建的系统发育树
Fig. 1 Phylogenetic tree of Strain W4 based on ITS rD NA sequences homology.
2结果与分析
2. 1 纤维素分解菌的初筛
挑取滤纸片上出现孔洞部位的菌落,
在PDA 培
养基上进行分离纯化,
最终得到 8株在分离培养基
上生长速度快,
且旺盛的真菌菌株。将初筛获得的
8株真菌进行了 CMC-Na 水解圈的测定(见表 1)。
表1真菌的 CM C-Na 水解情况
Table 1 CMC-Na hydrolytic ability of strains
Strain Dp value Strain Dp value
W3 6. 54 a 98DC 1. 53 c
W4 7. 29 a 109 DC 1. 73 c
W7 3. 23 b 98MJ 2. 91 b
W9 1. 34 c 109 MJ 1. 76 c
显著性 P = 0. 01
对初筛获得的 8株纯培养真菌菌株进行了滤纸
降解实验,
研究其纤维素降解能力。在为时 8 d 的
滤纸降解实验中有 3株真菌显示出明显的滤纸降解
效果,
在本文中列出了各菌株培养 6 d 后的滤纸降
解效果(表2)。
表2菌株培养 6 d 的滤纸降解效果
Table 2 Disintegration results of filter paper scrip with
isolates after culturing 6 d
Strain W3 W4 98MJ
Disaggregation degree + + + + + + + + + + + + + +
2. 2 纤维素降解菌株的鉴定
根据秸秆降解实验和酶活力测定实验(见1. 6
和1. 7),
菌株 W4 降解秸秆木质纤维素的能力最
强,
具有深入开展应用研究的潜力,
因此利用菌落形
态和 ITS 序列分析对菌株 W4 进行了菌株的鉴定。
结果表明,
菌株 W4 的菌落开展,
绒状,
表层着生一
层暗绿色分生孢子粉,
菌株生长后期背面观察呈褐
色。分生孢子梗光滑,
不对称分支 3 - 6 个,
排列紧
密,
其顶端着生 5 - 8 个短小的瓶状小梗,(8. 7 -
10. 6 )μm × 3. 0 μm,
分生孢子多,
呈椭圆形,
部分变
亚球形,
光滑,
长径 3. 1 - 3. 5 μm,
排成纠结的链。
将扩增并验证得到的片段测序,
然后经过 DNAMAN
软件校正和拼接,
获得 578 bp 的核苷酸序列。对
W4 菌株的 ITS 序列在 NCBI 网站上进行同源性比
较,
发现该序列与青霉菌的序列同源性 > 99 % ,
利用
MEGA4. 1 的Neighbor-Joining 进行系统发育树的构
建,
结果如图 1,
遗传距离显示菌株 W4 与青霉遗传
距离最近。结合形态观察,
参照《
真菌鉴定手册》
和
278
王洪媛等:三株高效秸秆纤维素降解真菌的筛选及其降解效果. /微生物学报(2010)50 (7)
中国真菌志(第三十五卷)-
青霉属及其相关有性型
属,
初步确定菌株 W4 属于青霉属扩张青霉组中的
扩张青霉(Penicillium expansum)。
菌株 W3 在PDA 培养基上生长时,
初期菌丝白
色透明,
菌落伸展迅速,
铺满平板后菌落逐渐增厚,
呈棉絮状,
此时产大量孢子,
显微镜下观察菌丝白色
透明,
分生,
有分生孢子头,
孢子球形,
半透明无隔,
初步鉴定其为木霉(Trichoderma sp. )。
菌株 98MJ 在PDA 培养基上生长缓慢,
菌落开
展,
绒状,
表层着生一层暗绿色分生孢子粉,
菌株生
长后期背面观察呈淡黄色。分生孢子梗无色,
不对
称分支,
排列紧密,
其顶端着生 6 - 10 个短小的瓶状
小梗,
分生孢子着生于与瓶状小梗上,
瓶状小梗大小
13. 0 ± 5. 6 μm × 3. 5 ± 0. 7 μm,
分生孢子链集成圆
柱形。分生孢子单细胞,
椭圆形,
光滑无色,4. 7 ±
1. 3 μm × 3. 5 ± 0. 6 μm。初步确定 98MJ 菌株属于
青霉属中的草酸青霉(Penicillium oxalicum)。
2. 3 秸秆降解情况
根据对 CMC-Na 的水解结果和滤纸的降解效
果,
选择真菌 W3、W4 和98MJ 进一步研究其秸秆纤
维素降解效果。实验分别对这 3株菌在培养 5 d 和
10 d 后的秸秆变化情况进行了测定。秸秆的重量
和各组分的含量以及秸秆的失重率和各组分的降解
率分别在表 3和图 2中列出。
表3菌株降解 10 天后秸秆各组分的含量
Table 3 Contents of cellulose,hemicellulose and lignin of straw after being degraded 10 d
Time Strain Weight of straw / g Content of cellulose % Content of hemicellulose % Content of lignin %
0 day CK 1. 000 d 39. 57 b 34. 83 c 24. 77 b
W3 0. 720 d 53. 22 d 22. 64 b 23. 50 ab
5 day W4 0. 744 d 51. 72 d 17. 47 a 22. 31 ab
98MJ 0. 732 d 53. 47 d 19. 95 ab 20. 63 a
W3 0. 547 b 41. 86 c 21. 57 b 31. 99 c
10 day W4 0. 437 a 37. 07 a 16. 93 a 37. 53 d
98MJ 0. 668 c 54. 49 d 17. 22 a 32. 49 c
P = 0. 01
图2菌株降解 10 天后秸秆组分的变化情况
Fig. 2 Chan ges of straw component after being degraded 10 d by
strains.
培养 5 d 后,3株真菌菌株 98MJ、W3 和W4 的
秸秆木质纤维素都有所分解,
但差异性不大,
秸秆失
重率分别为 26. 8 % 、28. 0% 和25. 6 % 。在前 5 d,
木
质纤维素中半纤维素的含量明显降低,
菌株 98MJ、
W3 和W4 对半纤维素的相对降解率分别为
58. 08% 、53. 20 % 和62. 68 % 。培养 10 d 后,
纤维素
的相对含量 迅速降 低,
其降解率分别为 42. 13% 、
8. 01 % 和59. 06% 。培 养 10 d 后,3株真菌菌株
98MJ、W3 和W4 的秸秆失重率都有了显著的增加,
分别为 33. 2% 、45. 3% 和56. 3% ,
尤其是菌株 W4 ,
其降解秸秆木质纤维素的能力最高,
纤维素、
半纤维
素和木质素的分解率分别为 59. 06% 、78. 75% 和
33. 79% 。
2. 4 纤维素酶活测定结果
测定菌株 98MJ、W3、W4 各自制备的粗酶液的
胞外纤维 素 酶活,
其中包括外切葡聚糖酶(CBH /
Cex)、
内切葡聚糖酶(EG / Cen )、
β-
葡萄糖苷酶(β-
Gase)[9]三种纤维素酶以及反映纤维素酶系总效率
的滤纸酶活(FPase)。
结果表明,3株真菌具有较强的胞外 纤维素酶
活力,
而且其外切葡聚糖酶活(5. 78 - 49. 75 U /mL)
和β-
葡萄糖苷酶活(5. 48 - 33. 29 U / mL)普遍高于
内切葡聚糖酶活(2. 89 - 14. 25 U / mL)和滤纸酶活
(2. 95 - 21. 27 U / mL)(见表 4)。3株真菌的胞外纤
维素酶活间具有显著差异,
菌株 W4 (14. 25 - 49. 75
U / mL)>菌株 W3(4. 17 - 9. 46 U / mL)>菌株 98MJ
(2. 89 - 5. 78 U / mL ),
其中菌株 W4 的纤维素酶活
最强,
这与秸秆纤维素降解实验的结果一致。
378
Hongyuan Wang et al. / Acta Microbiologica S inica (2010 )50 (7)
表4纤维素酶活力测定结果
Table 4 Enzyme activity results of strains
Strain W3 W4 98 MJ
Enzyme
activity
U / mL
FPase 4. 17 b 21. 27 c 2. 95 a
EG 4. 26 b 14. 25 c 2. 89 a
CBH 9. 46 b 49. 75 c 5. 78 a
β-Gase 8. 68 b 33. 29 c 5. 48 a
P = 0. 01
目前,
木质纤维素降解酶的研究与应用主要集
中于产酶量大、
酶系组成比较齐全的木霉、
白腐菌、
青霉属等菌株[10]。而与白腐菌相比,
青霉菌又具有
易培养和生长快的优势。因此,
青霉具有很高的商
业价值和潜力应用于木质纤维素的降解。已报道产
木质纤维素降解酶系的青霉菌株有 19 种之多,
其中
尤以斜卧青霉(Penicillium . decumbens)、
微紫青霉
(Penicillium janthinellum )和绳状青霉(Penicillium
funiculosum )等菌株的产酶能力最高[11]。也有关于
草酸青霉产酶的报告,
但酶活力不高[12 - 13 ]。
扩张青霉 W4 是本研究获得的纤维素酶活力最强
的菌 株,
其胞 外 纤维素 酶 活 在 14. 25 - 49. 75 U / mL
之间,
高 于 许 多 已 报 道 的 菌 株[14 - 18 ]。马旭光
等[14 ]通过航空诱变获得的纤维素降解菌 ZM-8
的纤维素酶活力在1. 84 - 2 0. 14 U / mL。Aham ed
等[15 ]研究表明工业生产中常用的纤维素酶生产菌
株里氏木霉 RUT-C30 产生的 FPase 为5. 02 U / mL,
CMCase 活力为 4. 2 U / mL。刘韫滔等[16]获得的高
效纤维素 降 解菌斜卧 青 霉 L-06 的纤 维 素 酶活在
3. 14 - 25. 31 U /mL之间。张明珠等[17 ]获得的包括
白腐真菌、
绿色木霉在内的7种具有降解纤维材料能
力的 菌 株,
纤维 素 酶 的 活 力 在0. 28 - 12. 54 U / mL。
另有研究表明[1 8],
浓度为 2. 5 g /L 的商业纤维素酶
Celluzyme 的FPase 酶活为 9. 20 U /L。扩张青霉 W4
是一株十分具有研究开发潜力的纤维素酶生产
菌株。
3结论
(1)筛选到 3株具有较强降解纤维素的真菌菌
株,
经初步鉴定 98MJ 为草酸青霉、W3 为木霉、W4
为扩张青霉。
(2)获得 1株具有高效降解木质纤维素的菌株
扩张青霉 W4,
其在 10 d 内秸秆降解率为 56. 3% ,
纤
维素、
半 纤 维 素 和 木 质 素 的 分 解 率 为 59. 06% 、
78. 75% 和33. 79% ,
胞外纤维素酶活力在 14. 25 -
49. 75 U / mL 之间,
是一株十分具有研究开发潜力的
纤维素酶生产菌株。
(3)秸秆纤维素分解率和胞外纤维素酶活力能
够比较准确的反映出菌株的秸秆木质纤维素降解能
力。
致谢 本文的研究过程中,
龚明波博士和殷中伟硕
士在菌株筛选、
酶活测定及秸秆降解实验中给予了
诸多帮助,
在此特表感谢。
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Screening of three straw-cellulose degrading microorganism
Hongyuan Wang,Bingquan Fan*
(Institute of Agricultural Resources and Regional Planning,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Beijing 100081,
China)
Abstract:[Objective]The aim of this study was to screen straw-cellulose degrading microorganisms and to investigate
their degradation ability of straw -cellulose. [Meth ods ]The methods used to screen the high effect straw-cellulose
degrading microorganism included the traditional isolation methods of straw-cellulose degrading microorganism such as
holes observation method on filter paper sheet,disintegration test of filter paper scrip,hydrolysis spot diameter
measurement method of CMC-Na,weight lose assay method of straw,measurement method of cellulose decomposition rate,
measurement method of extracellular enzyme activity. [Results]We isolated 3 fungi with cellulose degrading ability,of
which 98 MJ was identified as Penicillium oxalicum,W3 as Trichoderma sp. ,and W4 as Penicillium expansum. Strain W4
possessed high straw -cellulose degrading ability with straw-cellulose degrading rate of 56. 3% ,cellulose 59. 06% ,,
hemicellulose 78. 75% and lignin 33. 79 % in 10 days. [Co nclusion ]Strain W4 was a cellulase-producing strain with
broad development potential.
Keywords:Straw-cellulose;degrading microorganism;screening;cellulase
(本文责编:张晓丽)
Supporded by The 11th Five Years Key Programs for Science and Technology Development of China (2007BAD89 B13 )and the National Programs for
High Technology Research and Development of China(2006AA10Z426)
*Corresponding author. Tel:+ 86 -1 0-8210 6212 ;E-mail :Bqfan@ caas. ac. cn
Received:3 D ecember 2009 / Revised :19 April 2010
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